Applicability of papain solutions in immunohematology / Aplicabilidade de soluções de papaína em imuno-hematologia

ABSTRACT Objective: To compare the enzyme activity of different presentations of papain solution to validate in-house preparations. Methods: Two papain solutions were prepared, and the third presentation was a commercial solution. Tests were carried out with samples of red cells typed as weak RhD. Results: In-house prepared papain solutions showed similar enzyme reactivity, and statistically no differences compared to the enzyme activity of the commercial solution. Conclusion: Evaluating the cost-benefit ratio, the in-house prepared papain solutions present more economic advantages, and can be incorporated into immunohematological routines as a way to cope with periods of financial crisis and cost-containment policies.

RESUMO Objetivo: Comparar a atividade enzimática de diferentes apresentações de solução de papaína para validação de preparados in-house. Métodos: Foram preparadas duas soluções de papaína, e a terceira apresentação tratou-se de uma solução comercial. Os testes comparativos das reações enzimáticas foram realizados com amostras de hemácias tipadas como RhD fraco. Resultados: As soluções de papaína preparadas in-house apresentaram reatividade enzimática semelhante e estatisticamente sem diferenças em comparação com a atividade enzimática da solução comercial. Conclusão: Avaliando-se a relação entre custo e benefício, as soluções de papaína preparadas in-house são economicamente vantajosas, podendo ser incorporadas às rotinas imuno-hematológicas como forma de enfrentamento em períodos de crise financeira e em políticas de retenção de gastos.

Pilot study of homologous platelet gel in venous ulcers

Abstract: Background: Venous ulcers represent 70% of the lower limb ulcers. They are difficult to heal, requiring a correct diagnostic and therapeutic approach. Many products have been developed to healing, such as homologous platelet gel obtained from the platelet concentrate exceeding from blood transfusion. Objective: To evaluate the safety and efficacy of homologous platelet gel in venous ulcers compared with hydrocolloid dressing. Method: A pilot randomized clinical trial in patients with venous ulcers. Randomized groups (homologous platelet gel and hydrocolloid groups) were followed for 90 days and were assessed through the evolution of ulcerated area, qualitative analysis of vascularization and adverse events. Both groups used elastic compression. Results: We included 16 participants, with a total of 21 venous ulcers. Both treatments promoted a reduction of the areas of the ulcers in 90 days (mean 69%), there was significant difference between the groups concerning the gradual reduction of the ulcers areas, favorably to the hydrocolloid (70% vs 64%; p <0.01). There were some mild adverse events in both groups. Study limitations: Single-center study with a small number of patients, preventing more accurate assessment of the effects of platelet gel. Conclusion: The homologous platelet gel associated with the elastic compression can be an alternative to the venous ulcer treatment and is safe due to the occurrence of a few mild local adverse events and no serious adverse events. Clinical trials with larger numbers of patients must be performed to maintain the indication of this treatment for venous ulcer.

Platelet-rich plasma (PRP) applied during total knee arthroplasty / Plasma rico em Plaquetas (PRP) aplicado na artroplastia total do joelho

OBJECTIVE: To evaluate the efficacy of platelet-rich plasma regarding healing, pain and hemostasis after total knee arthroplasty, by means of a blinded randomized controlled and blinded clinical study. METHODS: Forty patients who were going to undergo implantation of a total knee prosthesis were selected and randomized. In 20 of these patients, platelet-rich plasma was applied before the joint capsule was closed. The hemoglobin (mg/dL) and hematocrit (%) levels were assayed before the operation and 24 and 48 h afterwards. The Womac questionnaire and a verbal pain scale were applied and knee range of motion measurements were made up to the second postoperative month. The statistical analysis compared the results with the aim of determining whether there were any differences between the groups at each of the evaluation times. RESULTS: The hemoglobin (mg/dL) and hematocrit (%) measurements made before the operation and 24 and 48 h afterwards did not show any significant differences between the groups (p > 0.05). The Womac questionnaire and the range of motion measured before the operation and up to the first two months also did not show any statistical differences between the groups (p > 0.05). The pain evaluation using the verbal scale showed that there was an advantage for the group that received platelet-rich plasma, 24 h, 48 h, one week, three weeks and two months after the operation (p < 0.05). CONCLUSIONS: In the manner in which the platelet-rich plasma was used, it was not shown to be effective for reducing bleeding or improving knee function after arthroplasty, in comparison with the controls. There was an advantage on the postoperative verbal pain scale. .

OBJETIVOS: Avaliar, por meio de um estudo clínico, randomizado, controlado e cego, a eficácia do plasma rico em plaquetas na cicatrização, dor e hemostasia após artroplastia total do joelho. MÉTODOS: Foram selecionados 40 pacientes que seriam submetidos a prótese total do joelho e randomizados. Em 20 desses pacientes foi aplicado o plasma rico em plaquetas antes do fechamento da cápsula articular. Foram feitas dosagens de hemoglobina (mg/dL) e hematócrito (%) no pré-operatório, após 24 e 48 horas da cirurgia. Foram aplicados o questionário Womac e a escala verbal da dor e medidas as amplitudes de movimento do joelho até o segundo mês pós-operatório. A análise estatística comparou os resultados a fim de comprovar haver diferença entre os grupos em cada um dos momentos da avaliação. RESULTADOS: Medidas do valor da hemoglobina (mg/dL) e hematócrito (%) feitas no pré-operatório, após 24 e 48 horas da cirurgia, não mostraram diferenças significativas entre os grupos (p > 0,05). O questionário Womac e a amplitude de movimento medida no pré-operatório e até os dois primeiros meses também não mostraram diferenças estatísticas entre os grupos (p > 0,05). A avaliação da dor por meio da escala verbal mostrou vantagem no grupo que usou o plasma rico em plaquetas após 24 e 48 horas, uma e três semanas e dois meses de pós-operatório (p < 0,05). CONCLUSÕES: Da maneira com que foi usado, o plasma rico em plaquetas não se mostrou efetivo para reduzir sangramento ou melhorar a função do joelho após a artroplastia em comparação com os controles. Houve vantagem na escala verbal de dor pós-operatória. .

Padronização de dosagem de produto de degradação fibrinogênio/fibrina humano / Human fibrin/fibrinogen degradation product dosage standardization

A hemostasia contribui para integridade e fluidez sanguinea. Após ativação de plaquetas, fatores da coagulação e células endoteliais ocorrem reações enzimáticas gerando trombina e fibrina, principal constituinte do trombo. A plasmina remove o coágulo degradando a fibrina em produtos solúveis (sistema fibrinolítico) e fragmentados (Produtos de Degradação da Fibrina - PDF) onde o Dímero D é o mais estável. Por isso torna-se um importante indicador do risco vascular. Realizaram-se 2 protocolos: LAMB F (Fibrinogênio) e Lamb D (Fragmentado D) produzindo 2786 hibridos com atividade anti PDF. Os hibridos selecionados foram submetidos à técnica de immunoblotting onde foram utilizadas as fontes de antigenos diferentes (Fib comercial, Fib purificado in house, Fragmento D, líquido de drenagem rico em PDF. Com base no reconhecimento das frações protéicas, selecionou-se 2 híbridos (LAMB F1 - 120 e LAMB D3-6), que foram clonados e expandidos em cultura (in vitro) e ascite (in vivo) para obtenção de altas concentrações de AcMm. O líquido ascítico foi purificado (coluna de afinidade)e os anticorpos acoplados em esferas (beads) de agarose. Testes qualitativos foram realizados em paralelo com o produto comercial (Dimer Test Dade Behring) utilizando 20 amostras de pacientes (15 PDF normal e 05 PDF alterado). Os resultados mostraram 100% de concordância entre o produto comercial e os anticorpos anti-PDF produzido no laboratório.

Cultura de condrócitos em arcabouço tridimensional: hidrogel de alginato / Chondrocyte cultures in tridimensional scaffold: alginate hydrogel

OBJETIVOS: O presente estudo teve como objetivo cultivar condrócitos retirados da articulação do joelho de coelhos encapsulados em hidrogel de alginato (HA) e caracterizar a produção de matriz extracelular (ECM). MÉTODOS: A cartilagem articular foi removida do joelho de coelhos, com três a seis meses, fragmentada em pedaços de 1mm e submetida à digestão enzimática. Uma concentração de 1x106 céls/mL foram ressuspensas em uma solução de alginato de sódio a 1,5 por cento (w/v), em seguida fez-se o processo de gelatinização em CaCl2 (102 mM), permitindo a formação do HA e cultivo em meio DMEM-F12 durante quatro semanas. A distribuição das células e a ECM foram acessadas através das secções histológicas coradas com e azul de toluidina hematoxilina e eosina (HE). RESULTADOS: Houve um aumento no número e na viabilidade dos condrócitos durante as quatro semanas de cultura. Através das análises histológicas dos HAs corados com azul de toluidina e HE foi possível observar a distribuição definida dos condrócitos no hidrogel, assemelhando-se a grupos isógenos e formação de matriz territorial. CONCLUSÃO: Este estudo demonstrou a eficiência do HA como arcabouço para ser usado na cultura de condrócitos, constituindo uma alternativa no reparo de lesões na cartilagem articular.

OBJECTIVES: The aim of this study was to culture chondrocytes from knee joint cartilage of rabbits encapsulated in alginate hydrogel (HA) and to characterize the production of extracelular matrix (ECM). METHODS: Joint cartilage was obtained from rabbits' knees, three to six months old, fragmented into 1-mm pieces and submitted to enzymatic digestion. A concentration of 1x106 cells/mL were re-suspended into a 1.5 percent (w/v) sodium alginate solution, followed by gel formation process with CaCl2 (102 mM), allowing HA to build for culturing it into a DMEM-F12 medium for four weeks. The distribution of cells and ECM were assessed from histological slices stained toluidine blue and hematoxyline-eosin (HE). RESULTS: There was an increase of the number and viability of the chondrocytes during the four weeks of culture. By assessing the histological sections stained with toluidine blue and HE, we could note the definitive distribution of chondrocytes in the hydrogel, similarly to isogenous groups and territorial matrix formation. CONCLUSION: In this study, the alginate was shown to be an effective scaffold for use in chondrocytes culture, constituting an alternative for repairing joint cartilage defects.

Distribuiçäo de hemoglobinopatias em populaçäo pré-escolar de Araraquara, Estado de Säo Paulo, Brasil / Distribution of the hemoglobinopathies in preschool population of Araraquara, State of Säo Paulo, Brazil

Foram analisadas 459 crianças na fase pré-escolar (1 a 7 anos), frequentadoras de Centros Recreativos Municipais da cidade de Araraquara no estado de Säo Paulo, com o objetivo de se verificar as distribuiçöes das hemoglobinopatias, bem como os índices hematimétricos desta populaçäo. Os resultadosevidenciaram freqüências de 8,1% de hemoglobinas anormais na populaçäo total, sendo que entre os caucasóides foram observados 3,2% de traço talassêmico beta, 2,52% de traço falcêmico e 0,6% de heterozigotos AC; e para os negróides as freqüências observadas foram de 4,9% de traço falcêmico 4.2% de heterozigotos AC; 2,1% de anemia falciforme e 0,7% de traço talassêmico beta. Com relaçäo aos parâmetros eritrométricos observamos que os valores médios do grupo de portadores de hemoglobinas AA encontram-se dentro dos valores normais preconizados pela literatura, mas nos limites inferiores de normalidade, sendo que ao verificarmos os valores individuais, 32,1% entre os caucasóides e 50% entre os negróides mostram valores de hemoglobina inferiores aos aceitos como normais pela O.M.S. > (12g/d1). Entre os portadores de hemoglobinas anormais observamos anemias moderadas, sendo que os valores individuais mostraram, entre os caucasóides, 100% dos portadores de traço talassêmico beta e 50% daqueles com traço falcêmico com hemoglobina abaixo e 12g/d1; e para os negróides, 87,5% dos portadores de traço falcêmico, 100% daqueles com anemia falciforme e 87,3% do heterozigotos AC com hemoglobina também inferior a 12g/d1